AAT Bioquest  21180  Cell Meter™ 熒光細(xì)胞內(nèi) pH 測(cè)定試劑盒

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AAT Bioquest 熒光細(xì)胞內(nèi)pH測(cè)定試劑盒

美國(guó)AAT Bioquest Inc.(前身是ABD Bioquest，Inc.)是一家為從事生命科學(xué)研究、診斷研發(fā)及藥物開(kāi)發(fā)的科學(xué)家研發(fā)、生產(chǎn)和銷售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，包括吸收（顏色），熒光和發(fā)光技術(shù)。AAT Bioquest的產(chǎn)品幫助 quan 世 jie 的科學(xué)家和生物醫(yī)藥研究者更好的了解生物化學(xué)，免疫學(xué)，細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)等領(lǐng)域。AAT Bioquest會(huì)不斷介紹新產(chǎn)品，快速的豐富各個(gè)領(lǐng)域的產(chǎn)品。

AAT Bioquest  21180  Cell Meter™ 熒光細(xì)胞內(nèi) pH 測(cè)定試劑盒  1000 Tests，產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品品牌：AAT Bioquest

產(chǎn)品貨號(hào)：21180

產(chǎn)品名稱：Cell Meter™ 熒光細(xì)胞內(nèi) pH 測(cè)定試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：1000 Tests

AAT Bioquest 熒光細(xì)胞內(nèi)pH測(cè)定試劑盒 

AAT Bioquest  21180  Cell Meter™ 熒光細(xì)胞內(nèi) pH 測(cè)定試劑盒  1000 Tests，產(chǎn)品說(shuō)明：

細(xì)胞內(nèi)pH值變化與多種生理和病理過(guò)程有關(guān)，包括細(xì)胞增殖，細(xì)胞凋亡，受精，惡性腫瘤，多藥耐藥性，離子轉(zhuǎn)運(yùn)，溶酶體貯積癥和阿爾茨海默病。細(xì)胞計(jì)™熒光法細(xì)胞內(nèi)pH測(cè)定試劑盒利用AAT Bioquest專有的熒光指示劑來(lái)測(cè)量細(xì)胞內(nèi)pH值的相對(duì)變化。它是一種均質(zhì)的動(dòng)力學(xué)活細(xì)胞熒光測(cè)定，采用標(biāo)準(zhǔn)程序或酸負(fù)荷程序。標(biāo)準(zhǔn)方案設(shè)計(jì)用于測(cè)量感興趣的治療靶點(diǎn)，治療時(shí)細(xì)胞內(nèi)pH值降低。“酸負(fù)荷"程序旨在測(cè)量與GPCR活化或生長(zhǎng)因子活性引起的細(xì)胞代謝變化相關(guān)的細(xì)胞內(nèi)pH值的增加。通過(guò)“酸負(fù)荷"程序，在熒光pH染料以最小體積加載到細(xì)胞中后，加入氯化銨溶液。該“酸加載"步驟之后在相對(duì)大體積（~4X）的緩沖液中添加激動(dòng)劑。突然的體積變化引發(fā)細(xì)胞中的氨（NH3）外排，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)pH值迅速降低，從而降低熒光信號(hào)。激動(dòng)劑對(duì)細(xì)胞內(nèi)pH后續(xù)恢復(fù)的影響通過(guò)相對(duì)熒光信號(hào)增加來(lái)測(cè)量。

平臺(tái)

熒光酶標(biāo)儀

Excitation：490納米

Emission：535納米

Cutoff：515納米

推薦板：黑色墻壁/透明底部

組件

組件A：RatioWorks™ BCFL，AM     1瓶

組件B：10X Pluronic F127 Plus   1 瓶 （10 mL）

組分C：HHBS（Hanks緩沖液，含20 mM肝素）     1 瓶 （100 mL）

組分 D：50 mM 準(zhǔn)備使用™probenecid  1 瓶 （10 mL）

用于標(biāo)準(zhǔn)電池負(fù)載（單板）

1.    在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中制備細(xì)胞

2.    加入等體積的RatioWorks™ BCFL，AM染料加工溶液

3.    在37°C孵育1小時(shí)

4.    在Ex/Em= 490/535 nm（截止= 515 nm）下讀取熒光，加入50 μL/孔化合物（或比率為500/530 nm和440/530 nm）

協(xié)議摘要

用于酸負(fù)荷（一個(gè) 96 孔板）

1.    在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中制備細(xì)胞

2.    去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基

3.    添加 RatioWorks™ BCFL、AM 染料工作溶液（50 μL/孔/96 孔板）

4.    在 37°C 下孵育 1 小時(shí)

5.    添加 220 mM NH₄氯（5 μL/孔）

6.    在室溫下孵育 15 分鐘

7.    在Ex/Em= 490/535 nm（截止= 515 nm）下讀取熒光，加入200 μL/孔化合物（或比率為500/530 nm和440/530 nm）

重要事項(xiàng)：在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)之前，在室溫下解凍所有試劑盒組分。

儲(chǔ)備溶液的制備

除非另有說(shuō)明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。避免反復(fù)凍融循環(huán)。

RatioWorks™ BCFL， AM 庫(kù)存解決方案

將 200 μL DMSO 加入 RatioWorks BCFL、AM（組分 A）的小瓶中，并充分混合以制成 RatioWorks™™ BCFL、AM 儲(chǔ)備溶液。

注意 20 μL 重構(gòu) RatioWorks™ BCFL、AM 儲(chǔ)備溶液足以用于 1 板標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞負(fù)載。10 μL 重構(gòu) RatioWorks™ BCFL、AM 儲(chǔ)備溶液足以用于 1 板酸負(fù)荷。RatioWorks™ BCFL，AM儲(chǔ)備溶液可以儲(chǔ)存在≤-20oC 如果管子密封嚴(yán)密，則一個(gè)月。避光。

工作溶液的制備

1. 用于標(biāo)準(zhǔn)電池負(fù)載（單板）

1. 將 1 mL 的 10X Pluronic F127 Plus（組分 B）加入 9 mL 的 HHBS（組分 C）中，充分混合制成 1X 測(cè)定緩沖液。

注意對(duì)于需要丙磺shu上樣的細(xì)胞（例如CHO細(xì)胞），稀釋50 mM準(zhǔn)備以™ 1至5 mM的濃度使用丙磺shu（組分D）（CHO細(xì)胞 shou xuan 5 mM）。

2. 將 20 μL 重構(gòu)的 RatioWorks BCFL、AM 儲(chǔ)備溶液加入 10 mL 的 1X 測(cè)定緩沖液中，充分混合，制成 RatioWorks™™ BCFL、AM 染料工作溶液。該RatioWorks™ BCFL，AM染料工作溶液在室溫下可穩(wěn)定至少2小時(shí)。

2. 用于酸負(fù)荷（一個(gè) 96 孔板）

1. 將 1 mL 的 10X Pluronic F127 Plus（組分 B）加入 4 mL 的 HHBS（組分 C）中，充分混合制成 1X 測(cè)定緩沖液。

注意對(duì)于需要丙磺shu上樣的細(xì)胞（例如CHO細(xì)胞），稀釋50 mM準(zhǔn)備以™ 0.5至2.5mM的濃度使用丙磺shu（組分D）（CHO細(xì)胞 shou xuan 2.5 mM）。

2. 將 10 μL 重構(gòu)的 RatioWorks BCFL、AM 儲(chǔ)備溶液加入 5 mL 的 1X 測(cè)定緩沖液中，充分混合，制成 RatioWorks™™ BCFL、AM 染料工作溶液。該RatioWorks™ BCFL，AM染料工作溶液在室溫下可穩(wěn)定至少2小時(shí)。

實(shí)驗(yàn)方案樣本

運(yùn)行標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞載量pH測(cè)定

1.    將 100 μL/孔（96 孔板）或 25 μL/孔（384 孔板）RatioWorks™ BCFL、AM 染料工作溶液添加到細(xì)胞板中。

注意 如果您的化合物干擾血清，請(qǐng)務(wù) bi yong  HHBS 緩沖液替換生長(zhǎng)培養(yǎng)基（100 孔板為 96 μL/孔，染料上樣前為 25 孔板為 384 μL/孔）。

2.    將染料加載板在細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育30分鐘，然后在室溫下再孵育板30分鐘。

注意如果測(cè)定需要37°C，請(qǐng)立即進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，無(wú)需進(jìn)一步室溫孵育。

3.    使用 HHBS 或所需的緩沖液制備復(fù)合板。

4.    通過(guò)監(jiān)測(cè)Ex / Em = 490 / 535 nm（截止= 515 nm）或500/530 nm和440/530 nm（截止= 515 nm）的熒光進(jìn)行比率測(cè)量來(lái)運(yùn)行pH測(cè)定?；衔锾砑恿繛?span> 50 μL/孔（96 孔板）或 25 μL/孔（384 孔板）。

注意 該測(cè)定應(yīng)在化合物添加后 3 至 5 分鐘內(nèi)完成，但建議在測(cè)定開(kāi)發(fā)期間至少收集 8 分鐘的數(shù)據(jù)。

運(yùn)行酸負(fù)荷的pH測(cè)定

1.    從細(xì)胞板中取出生長(zhǎng)培養(yǎng)基。

2.    將 50 μL/孔/96 孔板 RatioWorks™ BCFL、AM 染料工作溶液添加到細(xì)胞板中。

3.    將染料加載板在細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育30分鐘，然后在室溫下再孵育板30分鐘。注意：如果測(cè)定需要37°C，請(qǐng)立即進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，無(wú)需進(jìn)一步室溫孵育。

4.    加入 5 μL 220 mM NH4Cl 并將板離心 5 秒鐘。在室溫下孵育15分鐘。

注意新罕 bu shen 爾州4Cl溶液應(yīng)在HHBS（組分C）中新鮮制備。

5.    使用 HHBS 或所需的緩沖液制備復(fù)合板。

6.    通過(guò)監(jiān)測(cè)Ex / Em = 490 / 535 nm（截止= 515 nm）或500/530 nm和440/530 nm（截止= 515 nm）的熒光進(jìn)行比率測(cè)量來(lái)運(yùn)行pH測(cè)定?；衔锾砑恿繛?span> 200 μL/孔/96 孔板。

注意 該測(cè)定應(yīng)在化合物添加后 3 至 5 分鐘內(nèi)完成，但建議在測(cè)定開(kāi)發(fā)期間至少收集 8 分鐘的數(shù)據(jù)。

產(chǎn)品訂購(gòu)信息：

21180  Cell Meter™ 熒光細(xì)胞內(nèi) pH 測(cè)定試劑盒  1000 Tests